为加强医疗器械注册申报和技术审评指导，
，国家药监局器审中心组织制修订了《单纯疱疹病毒（HSV）核酸检测及分型试剂注册审查指导原则》等2项注册审查指导原则
，，现予发布。。。

　　特此通告。。。

 

　　附件：1.单纯疱疹病毒（HSV）核酸检测及分型试剂注册审查指导原则

　　　　　2.弓形虫、、、
、风疹病毒、、、巨细胞病毒、、、、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂注册审查指导原则（2023年修订版）

 

 

国家药品监督管理局  

医疗器械技术审评中心

2024年1月3日   
 

附件1： 

单纯疱疹病毒（HSV）核酸检测及分型试剂注册审查指导原则

本指导原则旨在指导注册申请人对单纯疱疹病毒核酸检测及分型试剂注册申报资料的准备及撰写
，，
，，同时也为技术审评部门提供参考。。。

本指导原则是对单纯疱疹病毒核酸检测及分型试剂的一般要求，，，注册申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用。。
。
。若不适用，，，，需具体阐述理由及相应的科学依据，，，，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。。。。

本指导原则是供注册申请人和技术审评人员使用的指导性文件
，
，但不包括审评审批所涉及的行政事项，，亦不作为法规强制执行，，应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
。
。。如果有能够满足相关法规要求的其他方法，，，
，也可以采用，，但是需要提供详细的研究和验证资料。。。。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定，，随着法规和标准的不断完善，，，以及科学技术的不断发展，，，，相关内容也将适时进行调整。。
。

一
、、
、、适用范围

本指导原则适用于利用基于实时荧光PCR（Real-Time PCR）的核酸检测技术
，
，，，以特定的单纯疱疹病毒1型（Herpes simplex virus type 1
，，HSV-1）和/或单纯疱疹病毒2型（Herpes simplex virus type 2
，，，，HSV-2）基因序列为检测目标
，，，对来源于人体样本中的单纯疱疹病毒DNA进行体外定性检测或分型检测的试剂，，
，临床主要应用于生殖器疱疹中单纯疱疹病毒感染的辅助诊断。
。如应用于其他部位，，
，应另行设计合理的临床试验进行验证。。

临床用于检测单纯疱疹病毒的检测试剂，，，可根据不同的适应证选择适用的样本类型
，，，生殖器疱疹的主要样本类型为生殖器皮肤黏膜皮损标本（如溃疡面渗液拭子，，，疱液等）、、、人泌尿生殖道拭子（如女性的宫颈拭子或阴道拭子、、男性的尿道拭子）。
。当应用于中枢神经系统感染时，，
，，可能涉及脑脊液样本。
。

对于采用其他方法学（如等温扩增
、、测序方法及其他方法等）、、、或者采用其他样本类型（如脑脊液等）的HSV核酸检测或分型试剂，，可能部分要求不完全适用或本文所述内容不够全面，，注册申请人应参照本指导原则
，，，，根据产品特性对适用部分进行评价，
，，并补充其他的评价。。

本指导原则适用于HSV核酸检测及分型试剂进行产品注册和变更注册的情形
。。。。本指导原则针对注册申报资料中的部分内容进行撰写
，，，其他未尽事宜应当符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》等相关法规要求，，，，同时建议参考《定性检测试剂分析性能评估注册审查指导原则》等适用的技术文件要求。。。。

二
、、
、
、注册审查要点

（一）监管信息

1.产品名称及分类编码

产品名称应符合《体外诊断试剂注册与备案管理办法》及相关法规的要求
，，
，，如单纯疱疹病毒1型（HSV-1）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）
、、、单纯疱疹病毒2型（HSV-2）核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）等。
。。按照《体外诊断试剂分类规则》，，，该产品按照第三类体外诊断试剂管理，
，
，，分类编码为6840。。
。

2.注册申请人还需提交产品列表、
、关联文件、
、申报前与监管机构的联系情况和沟通记录及符合性声明等文件
。。
。

（二）综述资料

综述资料主要包括概述、、、产品描述、、预期用途
、
、申报产品上市历史及其他需说明的内容
。。。。其中，
，，需注意以下内容
：

1.检验原理应详细说明产品所采用的技术原理及检测流程，，，明确产品检测的靶基因及靶序列，，需选择保守性和特异性相对较高的基因和靶序列，，，同时还应考虑扩增效率。。。提供引物和探针的设计依据。。
。提供核酸提取（手工和自动提取方式应分别明确）和PCR扩增的时间，
，，，提供不同适用机型的检测通量（如适用）。
。。。

2.预期用途需明确可检测的型别、、、靶基因、
、
、、样本类型、、、
、采样部位、、、、适用人群、、、
、临床适应证等。。。。

3.与已上市同类和/或前代产品的比较部分应着重包括方法学、、检验原理、、
、、样本类型、、
、采样部位及采样方式、、检测靶基因、
、、组成成分
、、内标、、、质控品、
、、、判读规则、
、、、不同HSV分型检出能力、、、、预期用途、、适用人群、
、、、分析性能和临床性能等方面
。。
。

（三）非临床资料

1.产品技术要求及检验报告

按照《医疗器械产品技术要求编写指导原则》的要求编写产品技术要求，，
，并提交三个不同批次符合产品技术要求的全项目检验报告。。提交资料应符合《体外诊断试剂注册申报资料要求及说明》《医疗器械注册自检管理规定》等相关文件的要求。
。
。

2.分析性能研究

注册申请人应当在原材料和生产工艺经过选择和确认、、、质量管理体系得到有效控制并且保证产品质量稳定的基础上，，，采用完整、、
、、确定的检测系统进行分析性能评估。。。。

对于每项分析性能的评价都应包括具体研究目的、、研究方法
、、试验方案、、试验数据、、、、统计分析等详细资料
。。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，，，包括试验地点
、
、、、采用的试剂名称、
、规格和批号，，，仪器名称和型号，
，，，样本类型和来源等
。。。
。分析性能评估的试验方法可以参考国际或国内有关体外诊断试剂性能评估的指导原则进行。。。

分析性能评估所用样本的基本信息均需明确，
，
，例如样本来源
、、、样本类型、、
、样本采集和处理方式、、稀释方式
、、、浓度或滴度（定值）确定过程及数据等。。研究中采用的HSV-1和/或HSV-2阳性样本
，
，应采用科学合理的方法确定其型别、、阴阳性和浓度水平，
，提交具体的试验资料。。建议研究样本浓度溯源到国际标准品。。分析性能评估用样本一般应为真实样本，
，，不建议采用质粒、、、
、假病毒等进行分析性能评估
，，如涉及稀释后检测，，，，应采用与适用样本类型一致的阴性基质进行稀释
。。对于各项性能中采用的样本
，，，，在下述各项性能研究资料中分别提供样本信息列表。。
。。检出限和包容性研究中所用样本应相互独立。。

针对适用的不同样本类型分别进行分析性能研究，，应包含常见的采样部位
。。

如试剂用于不同适用机型，，，需要在不同机型上分别进行性能评估
。。
。。如申报产品包含不同的包装规格，
，需要对各包装规格进行分析或验证。。

建议着重对以下分析性能进行研究。。。。

2.1样本稳定性

应充分考虑实际使用过程中样本采集、、处理
、、、运输及保存等各个阶段的条件
，
，
，，对不同样本类型的样本稳定性分别进行研究。。如有不同的样本采集处理方法（如不同采样拭子、
、采样过程、、、采集后未经处理的样本、、、加入不同裂解液/消化液的样本等）
、、、不同的样本保存介质（样本保存液及保存容器）、、、不同的样本运输和保存条件（如涉及）
，
，，，则需分别完成稳定性研究。。。。一般包括样本各种实际运输及保存条件下的保存期限验证。。
。可冷冻保存的样本还应对冻融次数进行合理验证。。

如核酸提取液可不立即进行检测
，，，，还需对核酸提取液的保存条件和保存时间进行研究。。。
。

2.2适用的样本类型

结合产品的适用人群、
、预期用途及HSV分型，，，列明产品适用的样本类型、
、、采样部位、、、样本采集方法（包括收集/保存介质）及添加剂，，采用合理方法评价其适用性。。。。

如申报产品包含多个样本类型，，如疱液或溃疡面渗液拭子、、男性尿道拭子、
、
、、女性宫颈或阴道拭子作为不同的样本类型需分别进行分析性能研究
。。研究样本应包含常见的采样部位（如外生殖器或肛直肠皮肤粘膜、、女性阴道
、、宫颈、、男性尿道等）。。。如产品适用于其他样本类型
，，应对其他所有样本类型进行全性能评估。。

如采用不同样本采集器、、、、不同样本保存液/稀释液 、、、、不同处理方法等，，，
，需分别进行分析性能研究。。。。

对于难获得的样本类型，，，，如疱液，，，可部分采用与临床阴性基质具有一致性的人工制备阴性基质进行最低检测限的确定，
，注册申请人需充分考虑基质效应的影响，，，保证人工制备样本与预期适用样本的检测结果无显著偏差
，，并提交研究资料
。。

2.3企业参考品验证

根据主要原材料研究资料中的企业参考品设置情况，，采用至少三批产品对企业参考品进行检验并提供详细的试验数据。。。
。

2.4准确度

可采用申报试剂与已明确型别和浓度样本或与已上市产品同时检测临床样本比较检测结果之间的一致性程度。。研究应纳入一定数量的阴性和阳性样本，，并注意包含一定数量的阳性判断值附近的样本和混合感染样本。
。。

不同的样本类型应分别进行准确度评价
。。。

2.5精密度

注册申请人根据试剂盒检测范围选择相应的HSV型别进行精密度验证。。。对于HSV-1和HSV-2通用及分型检测的试剂，，，，注册申请人需针对HSV-1和HSV-2检测靶标分别进行精密度评价，，
，，检测样本均需包含HSV-1和HSV-2的不同水平，，，，对于分型试剂
，，
，每个样本需分别提供HSV-1和HSV-2的分析结果。。

注册申请人应对精密度指标的评价标准做出合理要求，，，，如相应型别的阴阳性符合率
，，Ct值标准差或变异系数的范围等。。。应对可能影响检测精密度的主要变量设计合理的试验方案进行精密度评价，，包括运行
、
、、时间
、
、、操作者、
、、仪器、、、、试剂批次和地点等影响精密度的条件等。
。。。注册申请人应对检测数据进行统计分析，
，获得重复性、、、实验室内精密度、、、、实验室间精密度、
、、、批间精密度等结果。。

精密度评价试验应包含核酸提取步骤。。应设定合理的精密度评价周期，，例如为期至少20天的检测
。
。。。可采用可溯源的病毒株、
、临床分离培养物、
、临床样本进行试验
，，，，至少采用3个浓度水平。。。。具体要求如下：

阴性样本
：待测物浓度低于最低检测限，，
，阴性检出率应为100%（n≥20）。。

检出限样本
：待测物浓度为检出限浓度，，
，阳性检出率应大于95%（n≥20）。。。。

中/强阳性样本：待测物浓度呈中度到强阳性，
，，阳性检出率为100%
，，且Ct值的CV≤5%（n≥20）。。。。

2.6检出限

注册申请人根据试剂盒检测范围选择相应的HSV型别进行检出限验证。。对于HSV-1和HSV-2通用及分型检测的试剂，，，应分别针对HSV-1和HSV-2进行最低检出限的确定和验证。。使用已明确HSV分型和浓度/滴度的多例病毒株/临床分离培养物，
，采用与适用样本类型及样本保存液一致的阴性基质进行系列稀释，，，，进行最低检测限的建立和验证。。。应提供上述病毒株或临床分离培养物的来源
、、制备方法、、、型别确认及量值确认等试验信息。。

2.6.1检出限确定

每个型别选取至少3种不同病毒株/临床分离培养物
，，，分别进行系列稀释获得多个浓度梯度，
，每个浓度梯度重复检测不少于3次
，，，，记录每个浓度梯度的定性检测结果以及Ct值
，，，，以100%可检出的最低浓度水平作为预设检测限。
。。
。在此浓度附近制备若干浓度梯度样品，，，，每个浓度至少重复检测20次，，，将具有95%阳性检出率的最低浓度作为最低检测限。。也可采用适当的模型（如Probit分析）和分析方法将具有95%阳性检出率的最低浓度水平作为确定的检出限
。。。。

2.6.2检出限验证

分别选择与2.6.1不同来源的HSV-1和HSV-2样本，，，
，至少各3例在检出限浓度水平进行验证，，
，
，采用临床阴性基质稀释到最低检测限浓度水平重复20次检测，，阳性检出率应不低于95%
。。

注册申请人应能够提供用于最低检出限验证的病毒株的来源
、、、、浓度及型别确认试验等信息
。
。应对不同样本类型及不同样本保存液（如涉及）分别评价最低检出限。。
。

2.7包容性

2.7.1采用生物信息学方法对产品检测的包容性进行分析
，，，，应覆盖已公布的单纯疱疹病毒核酸序列。。。

2.7.2根据试剂盒检测范围选择具有时间和区域特征性的不同来源的HSV-1和/或HSV-2阳性临床样本或分型及浓度明确的HSV-1及HSV-2病毒株各不少于5例进行包容性研究。。。研究内容应包括重复性、、、检出限等。。。。注册申请人应能够提供用于包容性验证的样本来源、、、样本类型、、、型别及确认方法
、、
、浓度或滴度及其确定方法
、、、试验数据等详细信息。。
。对于检出限浓度附近样本未能检出的样本，，应逐步提高浓度进行分析以确定其最低检出限。。包容性验证所用临床样本或病毒株与最低检测限研究的样本不能重复使用。。。。

2.8分析特异性

2.8.1交叉反应

注册申请人首先应针对被检测靶序列与人基因组及可能存在于生殖器皮肤粘膜、
、、、人类泌尿、
、、生殖道的微生物基因组进行基因序列比对，，并提交比对结果，，，
，如有同源性序列则应进行交叉反应验证。。。

建议使用相应病原体阳性的临床样本或添加了病原体培养物的阴性临床样本进行交叉反应研究。。。。样本基质应与预期检测样本类型一致，
，，，应对每种适用的样本类型进行交叉反应研究。
。

交叉反应验证主要考虑下述的可能性：人基因组DNA、、、采样部位可能存在的定植菌、
、、
、可经性传播的其他病原体、、易引起相同或相似临床症状的其他病原体、、、核酸序列具有同源性的病原体及需要验证的其他常见病原体等
，，，以及临床需进行鉴别诊断的其他情形
。
。

需验证多例高浓度人类基因组DNA和适用样本类型可能存在的相关微生物的交叉反应
。。。建议对以下微生物进行交叉反应研究（“*”表示必做项目, “/”表示选择其中一种,括号中“、、、”表示相应型别均需要验证）：

病毒类：常见高危型人乳头瘤病毒（16、、、18、、、、52、、、58)*、、单纯疱疹病毒1型*、、、单纯疱疹病毒2型*
、
、
、
、水痘-带状疱疹病毒*、、、、EB病毒*、
、
、、巨细胞病毒*、、
、传染性软疣病毒*、、人类免疫缺陷病毒*、、、肠道病毒（70、、71）*、、、腺病毒（3、、、7型）*、、、、人疱疹病毒6型、、人类疱疹病毒7型、
、人类疱疹病毒8型*、、、、柯萨奇病毒、、腮腺炎病毒
、、
、风疹病毒
、、、、人双埃可病毒。。。。

细菌类：淋病奈瑟菌*、、、B群链球菌*、
、
、杜克雷嗜血杆菌*、、、、肉芽肿荚膜杆菌*、、、阴道加德纳菌*、、、、厌氧菌*（消化球菌属/消化链球菌属）、、、卷曲乳杆菌/惰性乳杆菌/克氏动弯杆菌/阴道陌生菌/普雷沃菌属/纤毛菌属*、、、、大肠埃希菌*、、干酪乳杆菌*、、、、嗜酸乳杆菌*、、、表皮葡萄球菌/腐生葡萄球菌*、、粪肠球菌*、、屎肠球菌*、、、金黄色葡萄球菌*、、、阴道棒状杆菌、、短小棒状杆菌
、、、鲍曼不动杆菌、、、耻垢分枝杆菌、、、脆弱类杆菌、
、、
、阴沟肠杆菌
、、、
、甲型链球菌。。
。

真菌类：白色念珠菌*、
、光滑念珠菌*
。。。

其他：人型支原体*、、、生殖支原体*、、
、解脲脲原体*、、、、沙眼衣原体沙眼生物变种*、、、沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿变种*
、、、
、梅毒螺旋体苍白亚种*、、阴道毛滴虫*
、、刚地弓形虫。。。

建议在病毒和细菌感染的医学相关水平进行交叉反应的验证，，，，通常细菌感染的水平为10⁶ CFU/mL或更高，，，病毒为10⁵ PFU/mL或更高
，，也可采用其他合理方法定值的浓度，，，例如核酸浓度10⁷ copies/mL。。

注册申请人应提供所有用于交叉反应验证微生物的来源、、、组成、、
、种属/型别和浓度确认等试验资料。。。

2.8.2微生物干扰

注册申请人应充分考虑临床上容易与HSV1或HSV2合并感染的病原体，
，，在高浓度的情况下对低浓度（例如检出限浓度）HSV1或HSV2核酸检测的影响。。。。（如HSV-1/2对HSV-2/1的干扰，，，HIV、、
、
、HPV对HSV-1和/或HSV-2的干扰及其他可能共感染的病原体对HSV的干扰）。
。
。建议注册申请人结合申报试剂的反应模式
，
，采用可能混合感染的高浓度病原体对最低检测限浓度附近的HSV-1或HSV-2分别进行微生物干扰研究。。。。

2.8.3竞争性干扰

竞争性干扰研究的病原体组合建议为同一反应体系内病原体、、常见重症感染病原体及常见混合感染病原体。。
。对于HSV1和HSV2的多重核酸检测，
，，注册申请人应验证HSV-1及HSV-2相互之间的竞争性干扰
。。
。。

2.8.4其他干扰试验

应针对不同样本类型，，，分别评价可能存在的干扰情况。。建议采用单纯疱疹病毒临界阳性样本和阴性样本，，在每种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）条件下进行干扰试验。。HSV-1和HSV-2需分别进行干扰性研究。。
。提供干扰性研究的试验方案、、、分析方法、、、、无干扰的接受标准
，，，
，对结果进行合理的统计分析，，对比添加干扰物质前后的Ct值差异。。。。潜在的干扰物质包括内源性、、外源性、、
、、在样本采集和处理期间引入的物质及其他已报道的干扰物质。。。

泌尿生殖道拭子样本应至少选取全血（或血红蛋白和白细胞）
、、
、人白蛋白、、胆红素
、、、、宫颈粘液等进行研究。。
。。

常用药物的干扰：四环素、、、、阿奇霉素、、螺旋霉素、、、罗红霉素、
、米诺环素、、磺胺嘧啶、
、、、氢化可的松
、、、、地塞米松、、、阿昔洛韦、、、
、更昔洛韦
、、、、抗逆转录病毒药物等抗病毒药物、
、、阴道常用药物（如避孕药物、、、抗真菌药物，
，阴道炎治疗相关药物
，，
，激素类药物）、、、、女性卫生用品、、、阴道栓剂、
、
、阴道润滑剂
、、阴道清洗剂以及可引发采样部位药疹的常见药物
。。。。

其他样本类型的干扰性研究应根据适用样本类型可能含有的干扰物质进行相应研究，，需提供干扰物及浓度选择依据
。。。。注册申请人应对采用的不同核酸提取试剂、、、、样本采集器（包括采样拭子、、采样管、、、
、样本保存液等）等样本采样处理过程可能引入的对检测系统的干扰物质进行充分的干扰性研究。。
。。

2.9 HSV核酸DNA提取

在进行核酸检测之前
，
，建议有核酸（DNA）提取/纯化步骤。。该步骤的目的除最大量分离出目标DNA外，，，还应有相应的纯化作用
，，尽可能去除PCR抑制物。。无论申报产品是否含有DNA分离/纯化的组分，
，，注册申请人都应对配合使用的所有核酸提取试剂进行提取核酸纯度、
、、、浓度
、、、提取效率的研究
，，，
，并与质量较好的核酸提取试剂进行平行比对。。若产品适用两种或以上核酸提取试剂，，
，则每一种核酸提取试剂均需配合检测试剂进行抗干扰、、、、精密度和检出限的验证。。如果配套核酸提取试剂提取原理存在差异，，还需额外进行检出限的建立研究。。。。

2.10反应体系

2.10.1样本采集和处理

2.10.1.1详述样本采集部位、、、、采集方式、、、、样本处理方式的选择，，提供相关的研究资料。。包括对样本的收集、、、制备或处理、、运输（如涉及）和储存的方式进行验证，，，必要时进行选择和确认并提供相关的研究资料。。。。不同类型的样本应分别进行研究
。。。

2.10.1.2详述采样拭子及样本保存液的选择
：如对样本采集拭子的适用性验证，
，
，拭子对样本的洗脱效率
。。。。提供详细的保存液或裂解液的成分、、浓度
、、、使用量的要求及适用性验证资料等。
。配套的不同保存液或裂解液需验证检出限和重复性。
。。。

2.10.2核酸提取和反应体系

研究确定最佳核酸提取和反应体系，
，，包括核酸提取用的样本体积
、、洗脱体积和PCR反应加样体积、、各种酶浓度、、引物/探针浓度
、
、
、dNTPs浓度
、、dUTP浓度（如有）、、、阳离子浓度及反应各阶段温度、
、时间、
、、、循环数、、
、荧光采集条件及反应体积等。。。建议在保证核酸提取质量的情况下尽量扩大总反应体系和加样量，，，以提高检测灵敏度。
。。

提交不同适用机型基线和阈值循环数的确定资料。。
。

不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述
，
，，
，并提交验证资料
。。

2.11提交携带污染研究资料（如适用）
。。。采用合理的检测顺序对多组高浓度阳性样本和阴性样本交替检测评估携带污染。
。
。
。

3.稳定性研究资料

申报试剂的稳定性主要包括实时稳定性、、、运输稳定性、、、开瓶稳定性、、机载稳定性（如适用）及冻融次数限制等研究
，，
，，注册申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案
。
。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、
、
、、具体的实施方案、、详细的研究数据以及结论。。。。对于实时稳定性研究
，，，，应提供至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料。。对于开瓶稳定性研究应模拟真实使用情形
，，包括开瓶稳定性的开瓶频次和开瓶时间等。。。。

4.阳性判断值研究资料

阳性判断值确定资料主要指对申报产品用于结果判断的核酸检测的Ct值和/或核酸浓度临界值进行确认的资料。。包括确定基线、、、
、阈值、、、、阈值循环数（Ct）、、核酸浓度（如适用）等的研究资料等。。。。如判定值存在灰区
，，应提供灰区的确认资料。。。

阳性判断值研究样本来源应为预期人群，
，，并考虑不同性别、、
、年龄、
、地域
、、、、种族等因素，，
，，尽可能考虑样本来源的多样性、、、、代表性
，
，纳入申报产品覆盖的样本类型
、、、皮损部位（如适用），，，尽量纳入较多弱阳性的样本。。。对HSV-1和HSV-2应分别进行统计分析，，，
，对于仅申报检测一种亚型的试剂，
，注册申请人应纳入另一种亚型作为阴性样本进行统计分析。
。
。。提交阳性判断值研究所用样本的背景信息列表，，，至少包括性别、
、年龄、
、、样本类型、、
、皮损部位（如适用）、、临床诊断信息、、、、样本来源机构
、
、、检测结果等信息。。。。如采用其他研究方法，
，应说明其合理性
。
。。。

另外，，，建议注册申请人考虑建立阳性判断值时使用的受试者样本对于目标人群的代表性，，
，，，通过临床评价进一步验证和确认阳性判断值的准确性。。。

如果产品适用不同样本类型
，，，应对各样本类型进行阳性判断值的验证。。

提供内标检测结果范围的确定方法和研究资料。
。。。

5.其他资料

5.1主要原材料研究资料

此类产品的主要原材料包括引物、、探针
、
、、酶
、、dNTP、、核酸分离/纯化组分（如有）
、、、企业参考品、、对照品、、质控品等。。
。。应提供主要原材料的来源、、、
、选择、、、制备方法的研究资料，，质量分析证书，，
，主要原材料质量标准的制定和检验资料。。。。如主要原材料为企业自制
，，应提供其详细的制备、、、、鉴定和质量控制过程，，，
，其制备工艺必须相对稳定
；如主要原材料源于外购，，，，应提供资料包括：选择该原材料的依据及对比筛选试验资料、、
、选定的供应商名称，
，，，供应商提供的质量标准、
、
、原材料检验报告（质量证书）
，，以及该原材料到货后的入厂检验报告，，，，供应商应为原材料的生产商，，，不得随意更换。。。。注册申请人应对各主要原材料均明确质量控制标准。。

5.1.1核酸分离/纯化组分（如有）的主要组成、
、、、原理介绍及相关的验证资料。。

5.1.2引物和探针

应详述引物和探针的设计原则，
，，包括对包容性和特异性的考虑情况。。。提供引物、、、探针核酸序列、、模板核酸序列及两者的对应情况。。。建议每种病毒设计两套或多套引物、、
、、探针以供筛选，
，，针对所有预期适用的基因型别进行检出能力和特异性（如交叉反应）的评价，，，，选择最佳组合，，
，并提交筛选的研究数据。。。。引物
、、、
、探针的质量标准应至少包括序列准确性
、、纯度、、、浓度、、、探针标记的荧光素及功能性试验等。。
。注册申请人应提供验证资料或合成机构出具的质检证明，，如PAGE电泳结果或高效液相色谱法（HPLC）分析图谱等。。

5.1.3脱氧三磷酸核苷（dNTPs）

包括
：dATP、、、dUTP、、dGTP
、、dCTP和dTTP，，应提交对其纯度、、、
、浓度、
、保存稳定性等的验证资料
。。。。

5.1.4酶

需要的酶主要包括DNA聚合酶、、、、尿嘧啶DNA糖基化酶（如有）等，，，
，应分别对酶活性、、、功能性等进行评价和验证
。。。

DNA聚合酶
，，，，应具有DNA聚合酶活性
，，，无核酸内切酶活性，，
，，具热稳定性，，，如：94℃保温1小时后仍保持50%活性。
。。。根据酶的特性明确其外切酶活性。。

尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG/UNG），，，，具有水解尿嘧啶糖苷键的活性，，无核酸外切酶及核酸内切酶活性。
。应对酶活性及热稳定性进行合理验证。。

5.1.5核酸类检测试剂的包装材料和耗材应无脱氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）污染。。。。

5.1.6企业参考品：

如适用，，，应提交企业参考品的原料来源、、组成、、、、选择、、、、制备、、、毒株特性(如名称
、、型别)、、、阴/阳性及浓度/滴度确认方法或试剂等相关验证资料（溯源及定值资料等信息）。。。企业参考品的核酸性质应与产品预期检测的靶物质一致。。企业参考品的基质与临床样本收集/保存介质一致。。。。建议采用病毒株、、、
、临床分离培养物、、临床样本建立参考品，，不宜使用质粒、
、
、假病毒、、
、基因组提取/纯化物等。
。

企业参考品的项目应包括：阳性参考品、、阴性参考品
、、最低检测限参考品
、、、精密度参考品等。。
。。

阳性参考品的设置应着重考虑检出能力的验证，
，，，建议采用多个不同病例来源的HSV阳性样本进行制备，，
，，并设置不同滴度水平。。
。无论试剂盒能否进行HSV分型，，，阳性参考品均应针对所有适用的HSV分型分别设置。。
。。

阴性参考品应考虑分析特异性的评价，
，，，应纳入正常临床样本
、、含干扰因素的样本
、、、
、不在试剂盒检测范围内的HSV分型样本、、、、易引发相似症状的、、、易共感染的其他病原体阳性样品。。。。

最低检测限参考品
：注册申请人应明确检测限参考品中病毒核酸浓度的确定方法，，，明确检测限参考品中病毒核酸浓度的确定依据，，，检测限参考品中HSV核酸浓度应为申报产品检测限浓度或略高于检测限浓度。。
。

精密度参考品应至少包含两个浓度水平，
，，其中包含弱阳性水平
。。

5.1.7内对照（内标）、、、
、质控品

内对照（内标）设置应合理，，，，阴/阳性质控品宜采用混合临床样本或病毒株或假病毒制备。。。

内标以对管内抑制可能造成的假阴性结果进行质控。。注册申请人应对内标的引物、、、探针和模板的浓度做精确验证
，，
，保证内标荧光通道呈明显的阳性曲线，，，不应对目的基因的检测造成竞争性抑制而导致假阴性，，
，，对内标的Ct应有明确的范围要求。。。。

阴/阳性质控品应参与样本核酸的平行提取，，，，以对整个PCR反应过程、、、
、试剂/设备
、、、、交叉污染等环节进行合理质量控制。
。。。注册申请人应对各种质控品的Ct做出明确的范围要求
。。

5.2生产工艺研究资料

介绍产品主要生产工艺，，，，明确关键质量控制点，，，，可用流程图结合文字的方式表述，，提交主要生产工艺的确定及优化研究资料。
。

（四）临床试验

临床试验的开展
、、方案的制定以及报告的撰写等均应符合相关法规及《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求。。下面仅说明该类产品临床试验中应关注的重点问题
。。。。

1.研究方法

对于已有同类产品上市的试剂的临床研究
，
，
，选择境内已批准上市、、临床普遍认为质量较好的同类产品作为对比试剂，，，
，采用试验体外诊断试剂与之进行对比试验研究
，，，，评价本产品的临床性能。。。。

2.适用人群

临床试验受试者应包括各种可能有单纯疱疹病毒感染的人群，
，具有单纯疱疹病毒感染疑似症状的患者，，如生殖器疱疹、、、丘疱疹、、、疼痛性丘疹等
。
。男性和女性受试者应尽量均匀分布。。。

3.临床试验病例数

适当的样本量是保证试验体外诊断试剂临床性能得到准确评价的必要条件
。。临床试验样本量应满足统计学要求，，，，可采用适当的统计学方法进行估算。
。。根据相应临床试验设计，，，，可选择阴性符合率/特异度和阳性符合率/灵敏度，，分别估算最低阴性样本例数和阳性样本例数。。。。

对于泌尿生殖道拭子（如女性宫颈拭子或阴道拭子、、
、男性尿道拭子），，如临床试验采用试验体外诊断试剂与已上市同类产品进行比对的试验设计，，
，可采用单组目标值法样本量公式估算最低样本量。。。

 

 公式中，，n为样本量；Z_1-α/2、、Z_1-β为显著性水平和把握度的标准正态分布的分位数，，，，P₀为评价指标的临床可接受标准，，，，P_T为试验体外诊断试剂评价指标预期值。
。

基于现有认知，，评价指标的临床可接受标准（P₀）即HSV-1/HSV-2核酸试剂阳性符合率和阴性符合率原则上建议不低于95%。。当评价指标P接近100%时，，
，上述样本量估算方法可能不适用，，应考虑选择更加适宜的方法进行样本量估算，，如精确概率法等。。
。
。如临床试验研究有更合理的样本量估算方式，，在说明其合理性后亦可采用。。
。
。

样本量估算过程中需要考虑临床试验中病例的脱落剔除率，，
，，一般而言，，病例脱落剔除率不应高于10%。。此外
，，，，临床试验应纳入一定数量的弱阳性样本
。。。

对于生殖器疱疹皮肤黏膜皮损标本（如溃疡面渗液拭子
，，
，，疱液），，临床试验样本量应采用适当的统计学方法进行估算，
，，，并详细描述所使用统计方法及各个参数的确定依据。。  

如申报产品具有多种适用的样本类型，，不同样本类型之间存在较大差异，，例如：分析性能不同、、
、、临床性能不同、
、、适用人群不同、、适应证不同、、、阳性判断值不同等，，，，则可能需要分别进行临床试验设计，，，包括分别进行样本量估算和统计学分析
。。
。
。

如申请产品适用于脑炎/脑膜炎等其他相关适应证，，，，应根据产品预期用途，，
，，综合考虑产品风险进行科学的临床试验设计
。。。
。

4.临床研究单位的选择

应选择不少于3家（含3家）临床试验机构，，，按照相关法规
、、、、指导原则的要求开展临床试验
。。。。临床试验机构的选择应尽量考虑试验体外诊断试剂的特点和预期用途，，
，，综合流行病学背景，，，受试者的选择具有一定的地域代表性。。。。且临床试验机构应具有分子生物学方法检测的优势，，，
，试验操作人员应有足够的时间熟悉检测系统的各环节，，熟悉评价方案。。。
。

5.临床试验数据统计分析

应选择合适的统计方法对临床试验结果进行统计分析，
，，对于试验体外诊断试剂与对比试剂/方法的一致性评价，
，
，
，一般选择2×2表的形式总结两种试剂/方法的检测结果，，，，并据此计算阳性符合率/灵敏度、、、、阴性符合率/特异度、
、、、总符合率、、、Kappa值等指标及其置信区间。
。。

对于不一致样本，，应进行原因分析。。
。如临床试验方案规定采用其他方法进行确认，，，则确认结果不应纳入统计分析。。。

6.伦理学要求

临床试验必须符合赫尔辛基宣言的伦理学准则，，
，，必须获得临床试验机构伦理委员会的同意。。。研究者应充分考虑临床试验用样本的获得和试验结果对受试者的风险性，，应提交伦理委员会的审查意见。。。
。

7.质量控制

临床试验开始前，，建议进行临床试验的培训，，，，以熟悉并掌握相关试验方法的操作、、仪器、、技术性能等
，，，最大限度控制试验误差
。。整个试验过程都应处于有效的质量控制下，，，
，最大限度保证试验数据的准确性及可重复性。。

8.临床试验方案

体外诊断试剂临床试验应按照同一临床试验方案在多家临床试验机构开展，，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案，，，不可随意改动。
。
。。整个试验过程应在临床试验机构的实验室内并由该实验室的技术人员操作完成，，，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，，，不得随意干涉实验进程。
。。
。

试验方案应确定严格的入选/排除标准，，，，任何已入选的样本被排除出临床试验都应记录在案并明确说明原因。
。
。在试验操作过程和结果判定时
，，应采用盲法以保证试验结果的客观性
。。。。各临床试验机构选用的对比试剂/方法应保持一致，
，，以便进行合理的统计学分析。。另外，，，应考虑试验体外诊断试剂样本类型与对比试剂/方法样本类型的可比性；如有差异，，，，需提供充分的验证
。。。

9.临床试验报告

应对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、、、
、完整的阐述，，应该对整个临床试验实施过程、、结果分析、、结论等进行条理分明的描述，
，并应包括必要的数据和统计分析方法。。。。

 （五）产品说明书和标签样稿

产品说明书格式应符合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求。。
。产品说明书中技术内容均应与注册申报资料中的相关研究结果保持一致，，，，如某些内容引用自参考文献
，，，，应以规范格式进行标注
，，并单独列明文献的相关信息
。。

HSV病毒核酸检测及分型试剂说明书编写应重点关注以下内容
。。
。。

1.【预期用途】

1.1试剂盒用于体外定性检测XX样本中的HSV-1和HSV-2 核酸（DNA），，
，，如可分型则需明确。。适用样本类型应依据申报产品的分析性能评估和临床研究情况进行确认。
。
。。

1.2产品功能：结合目标人群的临床表现和其他诊断指标
，
，，，可用于生殖器疱疹中单纯疱疹病毒感染的辅助诊断。。。

1.3 临床背景信息：简要描述病原体生物学特征及致病性，，
，流行病学特征、
、、
、感染后临床表现及相关疾病等。。简要介绍HSV相关的临床或实验室诊断方法。。。
。

2.【检验原理】

简述核酸提取纯化及试剂盒检测原理，，，明确产品能够检测的目标基因信息及序列特征，，
，，明确内标基因名称及其作用
，，明确引物探针设计及探针标记荧光信息如采用了防污染措施，
，，，进行简要描述。。。

3.【主要组成成分】

明确试剂盒中各组分及具体成分，，，明确需要但未提供的材料，
，，，如核酸提取试剂、、样本采集管、、
、拭子、、、病毒保存液及其他配套使用的材料的产品名称、、、、生产厂家、、、
、货号及注册证号或备案号等信息。。。

4.【样本要求】

4.1样本采集要求：包括样本采集时间点的选择，，是否受临床症状、、、、用药情况等因素的影响等；

4.2样本采集方法：针对不同的样本类型分别详细描述样本采集方法和设备要求，，包括采样步骤、、、对采样拭子、、
、、样本保存容器和保存液的要求、、样本保存液体积、、、离心要求等。。。。建议明确经验证的配套使用的样本保存容器、、采样拭子和保存液的信息。。如有临床公认推荐的采样要求，，应遵循，，
，，并引用相应的技术规范或指南。。

4.3样本处理、、、、运送及保存：根据研究资料
，，明确对样本核酸提取前的预处理、、运送条件、、、
、保存条件及期限等信息。
。根据适用的情形，，，
，针对采样后放入保存液前的干燥拭子、、、加入样本保存液后核酸提取前、、核酸提取后样本等不同阶段的处理方式、、、保存稳定性及运送条件等
。。如声称样本可冷冻，，，，需明确冻融次数。
。
。

5.【检验方法】

详细说明试验操作的各个步骤。
。

明确核酸提取用的样本体积、、、洗脱体积和PCR加样体积，，阴阳性质控品与待测样本同步进行核酸提取操作。。。
。明确各适用机型的反应参数设置
，
，基线、、、循环阈值（Ct值）的选择方法，，以及各检测靶标对应的荧光通道。
。明确内标、
、、
、质控的检测结果Ct值范围。。。

6.【检验结果的解释】

结合阳性对照、、、、阴性对照、、内对照（内标）以及目标基因的检测结果，，通过扩增曲线和Ct值进行阴阳性的判断，，，，详述所有可能出现的结果组合及相应的解释Ct。
。如存在灰区，，，应同时说明对灰区的处理方式，
，包括在何种情况下需要进行重复检测，，，，重复检测的方法，，
，
，对样本可能采取的优化条件（如采集要求或采集方法）等。。。。

7.【检验方法局限性】

7.1本检测结果仅供临床参考，，如需确诊病例请结合临床症状及其他检测手段。。
。。

本试剂盒的检测结果应结合患者的症状/体征、
、、病史、、其他实验室诊断结果等情况进行综合分析以及解释，，，不得作为患者临床诊治或管理的唯一依据。。

7.2 HSV DNA检测阴性不能排除HSV感染。
。。

7.3导致假阴性/假阳性结果的可能性分析：

7.3.1不合理的样本采集、、处理
、
、运输及保存条件，，样本中目标物滴度过低
。。。。

7.3.2 HSV病毒核酸目标基因序列的变异或其他原因导致的序列改变。。

7.3.3同一患者不同时间、、、、不同部位或者多次采集样本会降低假阴性结果的可能性。。
。。

7.3.4未经验证的其他干扰，，如内源性或外源引入样本的物质。。

7.3.5样本间的交叉污染
。。。

7.3.6未经验证的其他交叉反应物质。。

8.【产品性能指标】详述以下性能指标：

描述产品性能，，包括以下内容：

8.1 国家标准品（如有）和企业参考品的符合率。。
。

8.2 检出限
：说明不同类型样本的最低检测限，，，
，简要介绍最低检出限的确定方法以及验证最低检出限所采用的菌株分型。。如HSV-1和HSV-2最低检测限不同，，，应分别列出。
。

8.3精密度：说明不同类型样本的重复性和重现性评价结果
。
。

8.4分析特异性：包括交叉反应和干扰物质。。。

8.4.1可能产生交叉反应的其他病原体的验证情况，，，建议以列表的方式描述病原体名称、、型别、、、浓度等信息。。

8.4.2样本中常见干扰物质对检测结果的影响，，，，应注明可接受的最高限值。。。。

8.5临床试验：简要介绍试验方法
、、受试者及样本、、、试验结果和结论等。。。。

9.【注意事项】应至少包括以下内容：

9.1如产品含有人源或动物源性物质，，，，应提供具有潜在传染性的警示性信息。。。

9.2临床实验室应严格遵守《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》等临床基因扩增实验室的管理规范。。核酸扩增实验应由经过专业培训的实验室人员严格按照说明书要求进行。。

9.3强调产品性能仅针对声称的适用样本类型及【样本要求】项下说明的样本采集和处理方法（包括采样拭子、、
、样本采集液等）进行了验证，，，其他样本类型或样本采集、、、、处理方法不能保证产品性能
。。。
。

三
、、、参考文献

[1]国家市场监督管理总局.体外诊断试剂注册与备案管理办法: 国家市场监督管理总局令第48号[Z].

[2]国家药品监督管理局.关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告:国家药品监督管理局2021年第122号[Z].

[3] 国家药监局 国家卫生健康委. 医疗器械临床试验质量管理规范: 国家药监局 国家卫生健康委2022年第28号[Z].

[4]国家药品监督管理局.关于发布《医疗器械注册自检管理规定》的公告:国家药品监督管理局2021年第126号[Z].

[5]国家药品监督管理局. 体外诊断试剂分类规则:国家药品监督管理局2021年第129号[Z].

[6]国家食品药品监督管理总局.体外诊断试剂说明书编写指导原则.国家食品药品监督管理总局公告2014年第17号[Z].

[7]国家药品监督管理局.体外诊断试剂临床试验技术指导原则
：国家药品监督管理局2021年第72号[Z].

[8]国家药品监督管理局.医疗器械产品技术要求编写指导原则：国家药品监督管理局2022年第8号[Z]. 

[9]国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心.定性检测体外诊断试剂分析性能评估注册审查指导原则：国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心2022年第36号[Z].

[10]WS/T 236-2017，，，生殖器疱疹诊断[S].

[11]李金明，，，，《实时荧光PCR技术》，，，第2版
，，科学出版社
，，2016[M].

[12]WHO. Laboratory diagnosis of sexually transmitted infections, including human immunodeficiency virus.2013 [Z].

[13]WHO. Guidelines for the treatment of Genital Herpes Simplex Virus. 2021[Z].

[14]WHO. Guidelines for The Management of Symptomatic Sexually Transmitted Infections, 2021 [Z].

[15]CDC. Sexually Transmitted Infections Treatment Guidelines, 2021 [Z].

 

附件2
：

弓形虫、、、风疹病毒、、
、巨细胞病毒、、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂注册审查指导原则（2023年修订版）

本指导原则旨在指导注册申请人对弓形虫、、、、风疹病毒、、、、巨细胞病毒
、、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白（Immunoglobulin G, IgG）抗体亲合力检测试剂注册申报资料的准备及撰写
，，
，，同时也为技术审评部门提供参考。
。。

本指导原则是对弓形虫、、、风疹病毒、
、、
、巨细胞病毒、
、单纯疱疹病毒抗体及IgG抗体亲合力检测试剂的一般要求，，，
，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，
，，若不适用，，，，需具体阐述理由及相应的科学依据，，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
。

本指导原则是供注册申请人和技术审评人员使用的指导性文件，
，，
，但不包括审评审批所涉及的行政事项，，亦不作为法规强制执行
，
，，应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
。如果有能够满足相关法规要求的其他方法，，也可以采用，，，，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。。。

本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，，随着法规和标准的不断完善
，，，以及科学技术的不断发展，，，，本指导原则相关内容也将适时进行调整。。。
。

一、、、适用范围

弓形虫(Toxoplasma, TOXO) 、、风疹病毒(Rubella virus, RV) 、
、、
、巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV) 及单纯疱疹病毒 (Herpes simplex virus, HSV) 四种病原体（以下简称“ToRCH”）已引起围产医学家和优生优育学家的关注
，，，
，如何应用应基于大量的研究及相关学科的诊疗指南
。。。。

本指导原则适用于采用免疫学方法
，，如酶联免疫法、、、、化学发光法
、、、
、免疫层析法等，，对人体血清、、、
、血浆、、、静脉全血样本中的ToRCH特异性抗体进行体外定性和/或半定量和/或定量检测的试剂。。
。结合临床表现和其他实验室指标，，
，可用于ToRCH感染辅助诊断。。同时也适用于对ToRCH特异性IgG抗体阳性的人血清和/或血浆和/或静脉全血样本中ToRCH特异性IgG亲合力进行体外定性检测的试剂，
，，，用于辅助判断感染时间，，
，排除近期原发性感染。。
。。本类试剂尚不用作产前筛查。
。。
。对基于其他方法学的试剂，，，可能部分要求不完全适用或本文所述内容不够全面，
，，
，申请人可以参照本指导原则
，，
，根据产品特性对适用部分进行评价或补充其他的评价资料进行相应验证。
。。。

本指导原则适用于弓形虫
、、、风疹病毒、、、巨细胞病毒、、、、单纯疱疹病毒抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂注册申请和变更注册申请的情形
。
。本指导原则针对相关产品注册申报资料中的部分内容进行撰写，
，其他未尽事宜应当符合相关法规要求。。。。

二、、、、注册审查要点

（一）监管信息

1.产品名称及分类编码

产品名称应符合相关法规的要求。
。根据《体外诊断试剂分类规则》，，
，该产品按照第三类体外诊断试剂管理，
，
，分类编码为6840
。。
。

2.其他信息还包括产品列表、、、关联文件、、申报前与监管机构的联系情况和沟通记录以及符合性声明等文件
。。

（二）综述资料

综述资料主要包括概述、、、产品描述、、预期用途、、、、申报产品上市历史及其他需说明的内容
。。。其中,产品描述应详述技术原理、、、、产品主要研究结果的总结和评价、、、与同类和/或前代产品的比较等。。与同类和/或前代产品的比较应着重从技术原理、、特异性抗原等主要组成成分、、
、、预期用途
、
、性能指标、、、、临床应用情况等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的主要区别。。。
。

另外，，
，，建议申请人对以下几方面内容进行着重介绍：

1.特定病原体的生物学特性，，包括形态与结构、
、、抵抗力、、感染过程等。
。。
。

2.特定病原体感染的传播途径、
、潜伏期、
、、、不同人群感染的临床症状、、
、、流行病学以及易感人群的说明。
。。

3.ToRCH特异性抗体及特异性IgG抗体亲合力动力学
。。。。

（三）非临床资料

1.产品技术要求及检验报告

注册申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下
，
，
，，根据产品研制、、、前期评价等结果
，，，，依据国家标准、、、行业标准及有关文献资料，
，，，结合产品特性按照《医疗器械产品技术要求编写指导原则》的要求编写。。该类产品作为第三类体外诊断试剂，，
，
，应当以附录形式明确主要原材料以及生产工艺要求
。。

第三类体外诊断试剂应当提供三个不同生产批次产品的检验报告。。
。如该项目已有国家标准品，
，技术要求中应体现国家标准品的相关要求，，并使用国家标准品进行检验。。。

可提交以下任一形式的检验报告：

（1）申请人出具的自检报告。。。。

（2）委托有资质的医疗器械检验机构出具的检验报告。。

如果拟申报试剂已有相应的国家/行业标准发布，，，，则性能指标要求不得低于上述标准要求。。

2.分析性能评估资料

注册申请人应提交在符合质量管理体系的环境下生产的试剂盒进行的所有分析性能评估资料，，包括具体研究方法、、
、试验方案、、试验数据、
、
、、统计分析等详细资料
。。有关分析性能评估的背景信息也应在申报资料中进行描述
，
，包括试验地点
，，采用的试剂名称、、、、规格和批号，，，仪器名称和型号
，
，样本类型和来源等。。分析性能评估的试验方法可以参考国际或国内有关体外诊断试剂性能评估的指导原则进行，，对于本类产品建议着重对以下分析性能进行研究。。

2.1样本稳定性

样本稳定性一般包括样本各种实际运输及储存（常温、、、冷藏和冷冻）条件下的保存期限验证，，以确认样本的保存条件及保存时间。。。。可以在合理的温度范围内，
，
，
，每间隔一定的时间段即对储存样本进行验证，，，，从而确认不同类型样本的稳定性
。。需要冷冻保存的样本应对冻融次数进行合理的验证。。。如果需对采集后的样本进行处理再进行检测，
，需提供样本处理前后的稳定性的研究。。

2.2适用样本类型

如果试剂适用于多种样本类型，
，，，应采用合理方法评价每种样本类型的适用性。。。对具有可比性的样本类型（如血清和血浆），，
，可采用同源比对研究，，，，对源自同一患者的不同类型的样本进行检测，
，，
，以验证检测结果的一致性，，样本量应具有统计学意义
，
，，，建议不低于50例；对于不具有可比性的样本类型，，，，应对每种样本类型分别进行分析性能评估
。
。。

如果试剂盒的样本类型（如：血浆、、全血样本）适用多种抗凝剂，，
，可采用一定数量同源样本通过比对试验的方法，
，，，验证各种抗凝剂的适用性
。。

2.3校准品的量值溯源和质控品的赋值

如包含校准品，，，，需提供校准品的量值溯源研究资料
。。

描述质控品的赋值（如适用）
。
。。需至少进行三批产品分别在不同适用机型的赋值研究。。。
。

2.4准确度/正确度

可采用申报试剂与对比方法（如：已上市产品）同时对一定数量的临床样本进行方法学比对研究，，，评价检测结果的一致性；也可以通过检测参考品（盘）分析申报产品检测结果与经确认结果的符合情况，，
，评价申报产品的准确度，，，
，参考品（盘）应经诊断准确度标准/其他成熟方法检测确认过或有准确临床诊断信息；对于有参考物质（国际参考物质、、、、国家标准品）的定量项目，，，也可使用参考物质评估试剂检测结果的偏倚。。

2.5精密度

应对精密度指标的评价标准做出合理要求
，
，，
，如标准差、
、
、变异系数或显色强度等，，，，针对本类产品的精密度评价主要包括以下要求
。。。

2.5.1对可能影响检测精密度的主要变量进行验证，
，
，，包括不同时间、、、地点、、
、、操作者、、、、检测轮次
、、、试剂批次、、适用仪器（如适用）等
。。

2.5.2设定合理的精密度评价周期，，例如：为期至少20天的检测，，每天至少由2人完成不少于2次的完整检测
，，，并对批内/批间、、日内/日间以及不同操作者之间的精密度进行综合评价。。

2.5.3用于精密度评价的临床样本应至少包含阴性样本、、、、检出限阳性样本以及中/强阳性样本三个水平。
。。

2.6空白限、、、检出限和定量限

2.6.1 ToRCH特异性抗体定性检测项目

建议采用已明确ToRCH特异性抗体滴度的临床阳性样本，，，，通过系列稀释，
，
，，进行检出限的建立和验证。。应采用合理方法确认临床样本的抗体类型和滴度，，，
，提供详细的确认方法及结果
。。

选取至少3份临床阳性样本，，，，系列稀释获得多个浓度梯度，，每个浓度重复检测不少于3次，，，，以100%可检出的最低浓度水平作为预设检出限。。。在此浓度附近制备若干浓度梯度样品
，，，，每个浓度至少重复检测20次，，，将具有95%（n≥20）阳性检出率的最低浓度作为检出限。。。另选取与上述不同的3份临床样本
，
，，稀释到检出限浓度水平进行验证
，，应达到95%（n≥20）阳性检出率
。。。

可给出连续量值信号的ToRCH特异性抗体定性检测项目，
，如基于酶联免疫吸附技术的检测试剂采用吸光度响应区别“有反应”和“无反应”结果。。。。对于此类检测检测项目，
，也可参考以下内容设定空白限和检出限。
。。。

2.6.2 ToRCH特异性抗体定量或半定量检测项目

对于可溯源至有量值的国际或国家标准品的定量检测项目和半定量检测项目，，，可参考国内外相关文件对空白限、、、检出限以及定量限进行建立及验证
。。

空白限
、、、检出限和定量限的建立及验证应分别选择多份样本在多天内对样本进行重复测量
，，，，需综合各种影响因素进行试验设计并选择合适的方法对数据进行分析。
。

建立和验证采用的临床样本不应重复。。。。如有其他科学合理的评价方法，，，，也可进行选择。。

2.7抗体滴度变化（适用于半定量和/或定量检测项目）和诊断灵敏度

2.7.1 ToRCH抗体检测试剂

介绍血清转换盘的组成和来源
。
。。。检测血清转换盘，，，用于评价检测试剂的诊断灵敏度及监测抗体滴度变化趋势的能力。。。。对于TOXO、
、
、RV等已有商业化血清转换盘的检测项目，，，建议选用商业化血清转换盘进行研究
；对于部分无商业化血清转换盘的检测项目，，，
，可选择合理的方法
，，如将标化的血清样本稀释等，，，，对抗体滴度变化及诊断灵敏度进行评价。。。。

2.7.2 ToRCH IgG抗体亲合力检测试剂

对急性感染（3～4个月内）和既往感染样本进行研究，，，样本可来自于血清转化盘或基于临床诊断的临床样本，，
，，以评价临床诊断灵敏度。。。

2.8分析特异性

2.8.1交叉反应

应对ToRCH的近缘病原体、、易引起相同或相似的临床症状及易合并感染的病原体（见表1）感染病人的高水平特异性抗体样本进行交叉反应研究。
。此外
，
，还应对高浓度病原体特异性IgG抗体与特异性IgM抗体的交叉反应进行验证。。。。

如果检测试剂采用基因重组抗原，，应增加对重组基因导入微生物特异性抗体的交叉反应评价
。。。例如，
，采用大肠埃希菌作为宿主菌进行重组抗原的表达
，，
，，建议考虑大肠埃希菌宿主自身蛋白以及载体骨架编码的蛋白与被测物之间可能产生的交叉反应
。。。

交叉反应用临床样本中相关病原体抗体滴度水平应较高，，，，并且抗体类型（IgM、、、IgG）应与申报试剂检测抗体类型一致，，
，
，如检测ToRCH IgG抗体，
，则应研究其与相关病原体特异性IgG抗体的交叉反应。。。。申请人应提交所有用于交叉反应验证的病原体抗体阳性样本的来源、
、、阴阳性和滴度确认等信息。。。

表1 用于交叉反应研究的病原体

微生物

其他ToRCH病原体*

E-B病毒*

细小病毒B19

乙型肝炎病毒*

甲型肝炎病毒*

水痘-带状疱疹病毒*

甲型流感病毒

乙型流感病毒

副流感病毒

肺炎支原体*

注：*标注的为必做项目

2.8.2干扰研究

应根据所采集样本类型，，，
，选择适用的干扰物质进行研究
。。。说明样本的制备方法及干扰研究的评价标准，，
，，确定可接受的干扰物质的极限浓度。。。

建议在每种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）下
，，采用待测抗体为弱阳性和阴性水平的多例样本进行试验，
，，应至少包括下列可能的干扰物质
。。
。。

2.8.2.1内源性干扰物质：总IgG、
、、总IgM、、、胆红素、、血红蛋白、、、甘油三酯、、自身免疫性抗体(抗核抗体、、、类风湿因子、、抗线粒体抗体等)、、、、异嗜性抗体（如：HAMA）、、、、高浓度ToRCH特异性IgG抗体与特异性IgM抗体的干扰。。

2.8.2.2常见治疗性药物：请依据检测项目选择合适的治疗药物进行干扰研究。。。。对于CMV抗体检测试剂建议纳入更昔洛韦、、
、、缬更昔洛韦等药物进行干扰研究；对于弓形虫抗体检测试剂建议评价乙酰螺旋霉素
、、、乙胺嘧啶
、、磺胺嘧啶、、、、甲酰四氢叶酸等常见治疗药物的影响；对于单纯疱疹病毒抗体检测试剂建议纳入阿昔洛韦、、、伐昔洛韦等干扰物质评价。。。。

2.8.2.3如适用全血样本，，，，应评价红细胞压积对检测结果的影响。。。。

2.9 ToRCHIgM抗体破坏试验

可采用对至少5份含有ToRCH特异性IgM抗体的样本进行IgM破坏试验研究，
，，，方法为采用特定的化学制剂（如2－巯基乙醇或二硫苏糖醇）处理样本后，，，
，重新进行检测，
，，，IgM检测结果应为阴性。。。

2.10钩状（HOOK）效应

须采用多份高滴度的ToRCH特异性抗体样本进行梯度稀释后由低浓度至高浓度开始检测，，，每个梯度的稀释液重复3～5次，，，对钩状效应进行合理的验证。。

2.11包容性

应选择来源于不同时间、
、不同地域的多份经合理方法确定的ToRCH特异性抗体阳性临床样本进行检测，，检测项目如存在不同型别（如：HSVⅠ型和Ⅱ型）
，
，，建议对所有型别进行验证，，，验证内容应包括重复性
、、、、检出限等，，检测结果应满足接收标准，
，，，需提供样本性质、、型别及浓度的确认方法、、、试验数据等支持性资料。
。

2.12线性区间及可报告区间（适用于半定量和定量项目）

线性区间的研究，
，，，需采用高浓度样本和阴性样本/低浓度样本配制一系列不同浓度的样本。。。当建立试剂的线性区间时，，，，需配制较预期线性区间更宽的9个左右不同浓度的样本（不包括阴性样本），，，每个样本进行多次重复检测，，，
，根据可接受线性偏差和各浓度的重复性，，，确定检测次数
。。。采用重复检测均值和预期值进行回归分析。。当验证试剂的线性区间时，，，
，需配制覆盖整个线性区间的至少5个不同浓度的样本，
，，每个样本至少重复检测2次。
。。。建议采用加权最小二乘回归等方法对检测结果进行回归分析，
，
，，提供散点图、、线性回归方程、
、、、相关系数及线性偏差等，，，结果应满足可接收标准。。

测量区间，
，，，也称分析测量区间，
，在该区间内，，，临床样本在未经稀释、、、浓缩，，或非常规测量程序中步骤的其他前处理情况下，，，，检测结果的线性偏差
、
、、不精密度和偏倚均在可接受范围内。。
。测量区间下限为定量限，
，线性区间包含测量区间。。。

如对超出测量区间的样本可进行稀释后检测，
，，应采用合适的方法确定试剂的稀释倍数和稀释液（如适用），
，从而确定试剂的可报告区间
。。
。稀释倍数的研究可采用多份高浓度临床样本进行梯度稀释，，计算稀释样本的浓度并与稀释系数相乘以计算未稀释样本的浓度，，，比较计算所得抗体浓度与已知值之间的差异。
。

2.13反应体系研究

2.13.1反应条件确定

申请人应考虑反应时间、
、、反应温度、
、、洗涤液体积和洗涤次数、
、
、、判读时间（如适用）等条件对产品性能的影响
，
，通过试验确定上述条件的最佳组合。。

2.13.2反应体系中样品加样方式及加样量确定

通过试验确定最佳的加样方式及加样量。。。如样本需采取稀释或其他必要的方法进行处理后方可用于最终检测，，
，申请人还应对样本稀释液及其用量、
、、、其他必要的处理方法等进行研究。。
。。对于IgM抗体检测试剂，
，，如采用间接法，
，，，建议考虑高浓度特异性IgG对结果的影响，
，合理设置IgG去除相关样本处理步骤，，以降低特异性IgG可能造成的假阴性和假阳性。。。

应对样本是否可以灭活
，，以及可采用的灭活方式、、灭活时间进行研究确定。。。

3.稳定性研究资料

申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案。。
。。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据
、、
、具体的实施方案
、、
、
、详细的研究数据以及结论。
。。。

3.1实时稳定性研究

提交至少三批申报产品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料。
。
。。明确储存的环境条件（如温度
、、、湿度和光照）及有效期。。。。

3.2使用稳定性

提交申报产品实际使用期间稳定性的研究资料，，应包括所有组成成分的开封稳定性
。。适用时提交复溶稳定性
、、机载稳定性及冻融次数研究资料等。。。。如涉及校准品，，还应提交校准频率或校准稳定性研究资料。。。明确产品使用的温度
、、湿度条件等。。。

3.3运输稳定性

提交申报产品可在特定或者预期的条件下运输的研究资料，，，，应说明产品正确运输的环境条件（如温度、、、
、湿度、
、
、光照和机械保护等）
。。。。同时说明产品的包装方式以及暴露的最差运输条件。。注意应考察经过运输条件后实时稳定性
。。

4.阳性判断值研究

提交对申报试剂阴性/灰区/阳性等结果判断的阳性判断值（cut-off,CO）确定的研究资料，，，，应包括具体的试验方案、、人群及样本选择、、、评价标准、、、
、统计学分析和研究数据等。。建立CO值的样本选择应考虑到地域性、
、、
、季节、
、不同的感染阶段和生理状态等因素的影响，
，
，并纳入一定数量的弱阳性样本。。。。

建议采用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve, ROC）的分析方式来选择确定合理的CO值，，，如试验结果分析存在灰区（equivocal zone），，则应明确灰区建立的基础。。
。

对于采用酶联免疫分析技术的检测试剂，，，在各检测条件固定的情况下，，，，申请人也可以采用确定临界值的常用方法，，通过：①确定CO值中的n数值（CO值=阴性样品平均A值+n×标准偏差）；②确定阴性样品A值的标准差；③临床样本CO值的验证；这三个步骤检测并计算确定试剂盒的CO值。。。
。

如产品适用多个样本类型，，，，应明确CO值在不同的样本类型是否存在差异，
，，如有差异
，，，
，应分别进行CO值的确定。
。

5.其他资料

5.1主要原材料研究资料

此类产品的主要原材料一般包括抗原、、抗体、
、、、质控品和/或校准品、、
、企业参考品等。。应提供主要原材料的选择与来源、、
、制备过程、、、质量控制标准等相关研究资料。。如主要原材料为企业自制，，应提供其详细的制备、
、、鉴定和质量控制过程；如主要原材料源于外购，，
，应提供资料包括：选择该原材料的依据及对比筛选试验资料、
、供应商提供的质量标准、
、、出厂检测报告以及该原材料到货后的入厂检验报告
。
。。

5.1.1抗原

应注重抗原选择，
，，
，详细描述抗原的名称、、生物学来源、、
、天然/重组表达信息及选择该抗原的依据。。。。提交抗原来源、
、制备过程、
、、、筛选及质量标准（外观、、、、蛋白浓度
、、、、纯度、、分子量
、
、功能性试验等）等详细试验资料。。

如抗原为企业自制，，需提供以下资料
：如为天然抗原，，则应对病原体毒株选择、、病原体培养、
、抗原提取及纯化、、、、鉴定等试验过程予以详述并提供相应研究资料；如为重组抗原，，则应提交有关特定基因选择、、基因序列、、、、克隆构建及转化
、、抗原表达及纯化、、、鉴定等详细试验资料，，重组抗原应明确与天然抗原结构的异同。。
。

5.1.2抗体

详述抗体的选择过程，，提交抗体的名称、、生物学来源、、、、免疫原及质量标准（外观、、、蛋白浓度
、、、、纯度、、分子量、、
、、效价、
、功能性试验等）等详细试验资料。。。
。

如抗体为企业自制，，需提供以下资料：如使用天然抗原作为免疫原则应明确该天然抗原的来源；如使用重组抗原或其他人工合成抗原作为免疫原，
，，应提供相应的核酸组分及重组抗原的序列信息。。
。

5.1.3其他主要原材料

除上述主要原材料外，，产品中包含的其他原料，，，如固相载体、
、、化学发光剂、、、、样本缓冲液等，
，，均应提交原料的选择及验证资料。。。明确原料的供应商和质量控制标准
。。免疫层析方法学的产品如适用于全血
，，，
，应介绍血细胞去除方式及相关原材料
，，，，并验证去除效果
。。。

5.1.4质控和/或校准品

校准品应溯源至现行的国家或国际参考品（如有），
，，，质控品应至少包含阴性和阳性两个水平
。
。。校准品和质控品基质应与待测样本相同或相似。。
。应提交相关原料的来源、、、、选择和阴
、、、阳性确认等相关研究资料
，，，，详述质控品和/或校准品的制备过程，，，明确供应商和质量控制标准
。。。企业应对质控品的检测结果做出明确的范围要求（试验有效性的判断）。。。

免疫层析方法学的产品应设置质控线，，，，详述质控线相关原材料（例如羊抗鼠IgG多克隆抗体）的选择依据和质量标准
。。
。
。

5.1.5企业参考品

应提交企业参考品的原料来源、、选择、、、制备、、、阴阳性及浓度/滴度确认方法或试剂（建议采用国内已上市的、
、临床上普遍认为质量较好的同类试剂）等相关研究资料并对企业参考品进行充分验证。。。企业参考品的基质应与待测样本相同。。。。

该类产品的企业参考品一般包括：阳性参考品
、
、阴性参考品
、、
、检出限参考品、、、重复性参考品、、、
、亲合力参考品等，，，申请人应根据产品特性及适用情况科学设置。。。。其中阳性参考品重在评估产品的包容性，，应选择不同来源的临床样本，，，并设置不同滴度水平。。
。阴性参考品应可评价产品的特异性，
，，除设置正常人血清/血浆样本外
，，，，还应包含可能的干扰（溶血、
、脂血、、、黄疸及自身免疫性疾病样本）和交叉样本，，对于检测ToRCH IgM抗体的试剂，，阴性参考品中建议包括ToRCH IgG抗体阳性样本。。。。检出限参考品可设置临床阳性样本的系列稀释样本，，，
，其中应包含最低检出限水平。。重复性参考品可设置至少两个水平的临床阳性样本，，，包括最低检出限附近浓度。。。亲合力参考品一般包括高浓度亲合力参考品、、、、低浓度亲合力参考品等，，对于同时检测ToRCH IgM和IgG抗体的试剂，，，，企业参考品需对IgM抗体和IgG抗体分别设置。。。

5.2生产工艺研究资料

5.2.1产品基本反应原理介绍。。。。

5.2.2主要生产工艺介绍，
，可用流程图方式表示，，，
，并简要说明主要生产工艺的确定依据。
。。

5.2.3包被/标记工艺研究
，，申请人应考虑如包被/标记液量、、浓度
、、时间、、条件等指标对产品性能的影响，，，通过试验确定上述指标的最佳组合
。。。

5.2.4显色（发光）系统、
、酶作用底物等的介绍以及最适条件研究。。

（四）临床评价资料

对于免于进行临床试验的临床评价检测项目，
，，临床评价可参照《免于临床试验的体外诊断试剂临床评价技术指导原则》相关内容开展研究，，如相关法规、、、文件有更新，
，
，，临床评价应符合更新后的要求。。。
。

对于未在《免于临床试验体外诊断试剂目录》的产品，
，，应进行临床试验
。。其临床试验的开展、、方案的制定以及报告的撰写等均应符合相关法规及《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求，，，如相关法规、、文件有更新，，临床试验应符合更新后的要求。。
。

1.临床试验方法

临床试验可采用试验体外诊断试剂与临床普遍认为质量较好的已上市同类产品进行比较研究试验，，
，证明两者等效，，，从而间接证明试验用体外诊断试剂临床性能满足预期用途的要求。。。
。对比试剂在预期用途、
、适用人群
、、、样本类型、
、、、检测性能等方面应与试验用体外诊断试剂具有较好的可比性。
。。临床试验方案中应针对对比试剂的选择及依据进行详细描述
。
。。

2.受试者选择及样本收集

临床试验方案中应根据试验体外诊断试剂的预期用途
、、、、适用人群和检测要求等合理确定临床试验受试者选择要求，
，
，包括：受试者入组/排除标准等。。

根据产品临床验证的目的，，入组人群应选择具有ToRCH感染症状/体征的人群、、、、与传染源有密切接触史的人群
、、、育龄妇女及孕妇作为研究对象
。。。

应适当纳入感染症状相似、、易混淆的其他病原体感染患者及自身免疫性疾病患者。。。
。

临床样本的采集、、
、处理、、、保存等应分别满足临床试验中所涉及各产品说明书相关要求
。
。
。

对于CMV等ToRCH病原体IgG抗体亲合力检测，，，其临床适用人群应为疑似原发性感染的人群。。入组方式可选择ToRCH特异性IgM和ToRCH特异性IgG抗体同时为阳性的样本作为亲合力检测的入组样本。。建议在临床报告的试验设计和研究结果中对入组样本的筛选入组过程进行详细描述。。

3.临床试验机构数量及要求

该类产品临床试验应在三家及以上符合要求的临床试验机构开展。
。。申请人应根据产品特点及其预期用途，，，综合流行病学背景，，，选择具有一定地域代表性的机构开展临床试验
。。

4.样本类型

ToRCH抗体及G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂适用的样本类型一般包括血清、、
、、血浆和静脉全血。。。

如申报产品所适用的样本类型同时包含血清、、、血浆，，且临床前研究证实检测性能没有差异（如血清、、、、血浆），，，则临床试验中可汇总统计。。对于静脉全血样本类型，，，建议进行同源比对
。。

5.临床试验样本量估算

适当的样本量是保证申报产品临床性能得到准确评价的必要条件。。。。临床试验样本量应满足统计学要求，，，，可采用适当的统计学方法进行估算。。

当采用申报产品与已上市同类产品进行对比试验时，
，，可采用单组目标值法样本量公式估算最低样本量。
。

公式中
，，，n为样本量；Z1-α/2、
、Z1-β为显著性水平和把握度的标准正态分布的分数位，
，
，P0为评价指标的临床可接受标准
，，，
，PT为试验用体外诊断试剂评价指标预期值。。。

对于ToRCH病原体抗体检测试剂的临床阴/阳性符合率，，，基于目前的科学认识，
，，建议P0不低于90%
。。
。。当选定的产品的符合率预期值（PT）远高于预期目标值时，，，，应采用其他的方法进行样本类的估算
。。当评价指标P接近100%时，，，，上述样本量估算方法可能不适用
，，应考虑选择更加适宜的方法进行样本量估算，，，如精确概率法等。
。。

对于ToRCH病原体G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂的临床高/低亲和性符合率，，，基于目前的科学认识，，，，建议P0不低于90%
。。
。

当选定的产品的符合率预期值（PT）远高于预期目标值时，
，应采用其他的方法进行样本类的估算。。当评价指标P接近100%时
，，上述样本量估算方法可能不适用，
，，应考虑选择更加适宜的方法进行样本量估算。。

对于ToRCH特异性IgG定量检测试剂
，，
，样本待测物浓度应覆盖检测范围，，，，并在各个浓度水平均应有一定量的样本例数。。。

临床试验样本量除需满足上述统计学估算的最低样本量要求外，，
，，还应保证入组病例覆盖受试者的各种特征；临床试验样本应包含一定数量的医学决定水平附近样本或灰区样本。。。
。

6.临床评价指标的选择与统计分析

临床评价指标应在临床试验的设计阶段确定，，，并在临床试验方案中予以明确。。

对于ToRCH抗体检测试剂，，临床评价指标主要包括试验体外诊断试剂与已上市同类产品相比的阳性符合率、、、阴性符合率等。。。统计分析一般以2×2四格表的形式总结两种分析方法的检测结果
，，并据此计算阳性符合率
、、、
、阴性符合率、、、总符合率、、、Kappa值等指标及其95%置信区间。。
。结果不符样本的复核结果不应纳入上述统计。。对于申请半定量意义的检测试剂，，
，其对比试验的等效性研究，
，应在上述统计分析的基础上
，，根据临床试验数据分布特点
，
，采用Pearson相关系数等统计方法对考核试剂检测值与对比试剂检测值线性相关关系进行分析。
。申请定量意义的IgG检测试剂
，
，，比如风疹病毒IgG检测试剂，，
，，评价指标通常还包括回归分析的回归系数、、、截距、、相关系数和决定系数等。。。根据临床试验数据绘制散点图，，
，
，并进行相关性分析。。。并采用Bland-Altman法，，
，计算一致性限度，，
，评价两种检测结果的一致性。。。一致性限度应在临床所能接受的界值范围内。
。还应采用回归分析对两种检测方法的一致性进行评价。。根据数据分布特点等因素选择适用的回归分析方法，，
，，回归分析应重点观察回归方程的回归系数和截距等指标
，，计算回归系数和截距的置信区间
。。。
。同时对相关评价指标进行假设检验。。。

对于ToRCH病原体G型免疫球蛋白抗体亲合力检测试剂，
，临床评价指标主要包括试验体外诊断试剂与已上市同类产品相比的高亲和性符合率、、
、、低亲和性符合率等。
。。。统计分析一般以2×2四格表的形式总结两种分析方法的检测结果，
，
，，并据此计算高亲和性符合率、、、、低亲和性符合率、、、、总符合率、、
、Kappa值等指标及其95%置信区间。。。

7.结果不符的样本

对于比较研究试验中申报产品与对比产品结果检测不一致以及量值差异较大的情况，，应进行合理的分析。。。如采用实验室参考方法或第三方检测试剂进行确认，，，
，结果不应用于修订原有统计结果
。
。

（五）产品说明书和标签样稿

产品说明书格式应符合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求
，，，，境外试剂的中文说明书除格式要求外
，，其内容应尽量保持与原文说明书的一致性，，，翻译力求准确且符合中文表达习惯。。产品说明书的技术内容应与注册申报资料中的相关研究结果保持一致，，，，如某些内容引用自参考文献，，则应以规范格式对此内容进行标注，，，并单独注明文献的相关信息。
。。

ToRCH特异性抗体和IgG抗体亲合力检测试剂说明书编写应重点关注以下内容：

1．【预期用途】应至少包括以下几部分内容
：

1.1试剂盒用于体外定性和/或半定量和/或定量，，，，检测人血清和/或血浆和/或静脉全血样本中xx的特异性IgG或IgM抗体。。
。。用于ToRCH病原体感染的辅助诊断。
。

1.2试剂盒用于体外定性检测人体血清和/或血浆和/或静脉全血样本中xx的特异性IgG亲合力。。作为ToRCH抗体检测的一种补充，
，用于辅助判断感染时间，，排除近期原发性感染。。。

1.3简单介绍病原体的特征，，如特定病原体的生物学特征、、流行病学、
、潜伏期
、、、易感人群、、不同人群感染后的临床表现等临床背景相关的信息介绍
；适用人群的介绍，，，，如具有何种症状/体征的患者
、
、、相关的密切接触者、、相关疾病流行情况、、
、、地域要求等。。

1.4人群中ToRCH特异性抗体的阳性率
、、
、ToRCH特异性抗体的产生、
、、持续时间、、、临床提示作用及与ToRCH核酸和抗体亲合力等其他检测指标的关联。
。

1.5明确说明ToRCH特异性IgM抗体检测不得用于无症状人群的产前筛查；不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。。

1.6特异性IgG抗体的亲合力检测试剂还应介绍亲合力动力学
，，，，亲合力高低与感染时间的关系
，，，，并明确不得将本试剂IgG抗体的低亲合力结果单独作为近期急性感染判断的依据。。。

1.7关于预期用途的几点考虑：

1.7.1 ToRCH抗体检测试剂作为病原体抗体检测试剂
，
，目前的临床意义仅限于抗体阴阳性及IgG抗体亲合力高低的判断和病原体特异性IgG抗体滴度变化趋势的观察。。

1.7.2定量检测试剂可溯源至国家或国际标准品如WHO标准品等标准品。。
。鉴于现在国际标准品的情况和临床需求，
，建议ToRCH IgM检测试剂的预期用途定义为定性检测。
。。

1.7.3抗体亲合力检测项目的确定
，，
，，应建立在明确的临床意义和技术可行性基础上
。
。

2.【适用仪器】

对于采用酶联免疫吸附法的检测试剂应明确适用酶标仪的波长要求，，其他方法学检测试剂应明确具体的适用仪器型号
。。。。

3.【样本要求】重点明确以下内容：

3.1对于ToRCH病原体IgM抗体检测试剂，，，如果检测系统含有某种IgG抗体的去除技术（IgG吸附剂），，，如抗人IgG抗体等，
，，
，则应包括IgG吸附剂使用相关的注意事项。。。。例如：经IgG吸附剂处理的样本不能用于IgG类抗体的检测；在检测IgM类抗体的同时
，，
，
，检测处理过的混合物中的IgG类抗体，
，以证实对IgG和类风湿因子（RF）等去除的有效性。。
。。

3.2对于IgG抗体亲合力检测试剂应明确适用的特异性IgG抗体阳性样本的浓度范围或信号值范围。
。

4.【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤
：

4.1检测试剂及样本的复温要求及相关注意事项
。。。例如：冻存样本在复融后应经过充分的混匀再行检测
。。。。

4.2试剂配制方法、、
、注意事项，，
，试剂开封后使用方法及注意事项等。。。
。

4.3高浓度样本稀释的方法及注意事项。
。
。。

4.4试验条件：操作步骤、、温度、
、时间、
、仪器波长以及试验过程中的注意事项等。
。

4.5定标（如适用）
：标准曲线的制定
，
，
，对需要进行重新定标情况的说明及对定标周期的建议。。

4.6质量控制：操作步骤，，质控结果的要求（试验有效性的判断），，
，，质控结果不符合要求的处理方式。。。如果质控品和病人样本的使用方法不同，，生产商应注明必要的指导和解释。。建议在质控品结果解释环节注明以下字样：“如果质控结果与预期不符，，，实验室不应出具检测报告”。。。

5.【检验结果的解释】

详细描述检测结果的判定标准或计算方法。
。。
。对阴阳性及血清转换或亲合力高低临床意义的说明，，
，，对后续试验的建议。。。。例：对于巨细胞病毒IgG抗体检测灰区样本，，，，建议另外进行巨细胞病毒IgM抗体检测或于2周后进行重复检测；对于IgG抗体亲合力灰区样本，
，应于2周后进行重复检测。。。对于半定量和定量的特异性IgG抗体检测试剂，，
，，还应明确抗体滴度变化的意义
。。。。由于ToRCH IgM假阳性结果可能造成不良后果，，建议提示临床医生对所有ToRCH IgM阳性结果应结合临床病史及其他的检测结果综合判断，
，，，不得作为ToRCH急性感染诊断的唯一依据。。。

对于ToRCH IgG定量检测试剂，，由于抗体的检测结果与检测方法及量值的溯源性相关
，，不同检测系统间的结果可能不一致。
。。建议企业给予相关提示。。。。

对于IgG抗体亲合力检测试剂
，，，，还应明确指出应配合相应的ToRCH IgG和IgM抗体检测试剂结果进行分析。。应提示
：临床医生检测的低亲合力结果不得作为近期急性感染判断的依据。。。

6.【检验方法局限性】

综合产品的预期用途、、
、、临床背景、、
、检测方法及适用范围等信息，，，，对可能出现的局限性进行相关说明，，主要包括以下描述
，
，，，请申请人选择适用的条款在产品说明书中予以阐述。。

6.1本产品检测结果仅供临床参考，，不应作为临床诊治的唯一依据，，，对患者的临床诊断应结合其症状/体征、、、病史、、、流行病学、、
、、其他实验室检查（如病原学检测）等信息综合考虑
。。

6.2感染初期，，，
，ToRCH特异性抗体未产生或低于检出限，，
，会导致阴性结果
，
，，，如怀疑有病原体感染，
，，，应提示患者在一段时间内复查，，，如2周以上，，，，抽取第二份样本，，并在与第一份样本同条件下时进行检测，，以确定是否有初次感染的血清转化或ToRCH特异性IgM或IgG抗体明显升高。
。。。（企业应注明第一份样本的保存条件，，，并提交相应的支持资料）

6.3ToRCH特异性IgG阴性，，，
，可能出现于疾病急性感染的早期，，阴性结果应结合临床症状或病原接触情况，，
，
，并结合其他诊断检测方法加以解释。。。。

6.4对于采用间接法的ToRCH IgM抗体检测试剂，，
，，高滴度ToRCH特异性IgG抗体会与特异性IgM抗体竞争抗原结合部位，，，会使检测的敏感性降低
，，，，特异性IgM抗体结果可能会出现假性低值或阴性结果。
。。。

6.5由于孕妇ToRCH IgM抗体的实验室检查存在较高的假阳性风险，
，不能可靠地鉴定胎儿患病的风险
，，，故不建议对无症状孕妇的ToRCH IgM抗体进行筛查。。不得将本试剂的检测结果单独作为终止妊娠的依据。。

6.6免疫功能受损或接受免疫抑制治疗的患者，，，，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染患者或器官移植后接受免疫抑制治疗的患者
，，
，，其抗体及抗体亲合力检测的参考价值有限，，可能会导致错误的医学解释。。

6.7在近几个月内接受过输血或其他血液制品治疗的人群
，，，对其阳性检测结果的分析应慎重。。。。

6.8部分ToRCH（如风疹病毒）特异性IgM抗体不仅出现于初次感染，，，当二次感染和复发感染时也可能出现。。个别个体的ToRCH特异性IgM抗体,在初次感染较长时间后仍能检出
，
，，，因此对特异性IgM抗体阳性在判断初次感染时间的解释中应慎重。。。

6.9当处于低流行率地区的无症状人群或已接种过特定ToRCH疫苗的个体检出ToRCH IgM阳性结果时，，，，应警惕可能出现的假阳性结果。。。
。同时建议临床医生结合其症状/体征、、病史、、流行病学、、、、其他实验室检查（如IgG抗体亲合力和病原学检测）进行判断。
。。建议对申报试剂临床研究中的病例人群特征进行说明，，并对适用人群的年龄
、、、地域等特征进行明示。。

6.10人血清中的异嗜性抗体可能与试剂中的免疫球蛋白结合干扰试验结果，
，对于经常接触动物或动物血清制品的人群，，，
，应警惕可能出现的异常干扰结果。。。。

6.11接受过小鼠单克隆抗体治疗的患者样本中，，可能含有人抗小鼠抗体（HAMA）。
。
。对于试剂盒组成成份中含有小鼠源性抗体的检测试剂，，
，若待测样本中含有HAMA，，，，会影响检测结果的准确性。。。

6.12体内存在的高浓度的链霉亲合素（亲合素）抗体和发光标志物抗体可能会影响检测结果。。。

6.13由于ToRCH IgG抗体亲合力成熟过程存在个体差异，
，个别个体在初次感染较长时间后仍呈现ToRCH IgG抗体低亲合力，，，因此不得将本试剂IgG抗体的低亲合力结果单独作为近期急性感染判断的依据。
。。
。

7.【产品性能指标】 请依据研究资料详述各性能指标，，应注意以下方面：

7.1最低检出限：说明试剂的最低检出浓度或滴度，，，简单介绍最低检出限的确定方法
。。

7.2 分析特异性

7.2.1交叉反应
：对易产生交叉反应的其他病原体的高水平抗体、、高浓度ToRCH特异性IgG抗体等的验证情况。。

7.2.2干扰物质：样本中常见干扰物质对检测结果的影响，，，，如溶血
、、、脂血、、、黄疸等干扰因子研究（结果应量化表示
，，，，禁用轻度、、、、严重等模糊表述），，有关高浓度总IgM和总IgG抗体、、、、自身性免疫抗体（抗核抗体、、类风湿因子）等的干扰验证。。。

7.3抗体滴度变化（适用于半定量和/或定量检测试剂）和诊断灵敏度：介绍血清转换盘的来源
，，，将检测结果以图或表的形式列出。
。
。。

8.【注意事项】应至少包括以下内容：有关试剂盒内人源组分（如有）生物安全性的警告
。。。如：试剂盒内对照品（质控品）或其他可能含有人源物质的组分
，，，，虽已经通过了乙型肝炎病毒表面抗原（HBs-Ag）、、、、人类免疫缺陷病毒1/2型抗体（HIV1/2-Ab）、、、、丙型肝炎病毒抗体（HCV-Ab）等项目的检测，
，，，但截至目前，，
，没有任何一项检测可以确保绝对安全，
，，
，故仍应将这些组分作为潜在传染源对待
。。

（六）质量管理体系文件

申请人应当在申请注册时提交与产品研制、、
、、生产有关的质量管理体系相关资料。。
。详述产品的生产过程，，
，
，提供生产工艺流程图。。。明确申报产品反应及检测原理和过程
，，，，标明主要控制点与项目及主要原材料、、采购件的来源及质量控制方法。。

如适用，
，，
，应当提供拟核查产品与既往已通过核查产品在生产条件
、、
、、生产工艺等方面的对比说明。。。

三、、
、、参考文献

[1] 国家市场监督管理总局.体外诊断试剂注册与备案管理办法: 国家市场监督管理总局令第48号[Z].

[2] 国家药品监督管理局.体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式: 国家药品监督管理局2021年第122号公告[Z]. 

[3] 国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心.定性检测体外诊断试剂分析性能评估注册审查指导原则
：国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心2022年第36号通告[Z].

[4] 国家药品监督管理局.体外诊断试剂临床试验技术指导原则：国家药品监督管理局2021年第72号通告 [Z].

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[16]EP34：Establishing and Verifying an Extended Measuring Interval Through Specimen Dilution and Spiking [Z].

 

 

文章来自于国家药品监督管理局医疗器械技术审评中心